CRISPR/Cas13-rAAV
作用机制
CRISPR/Cas13系统的作用机制主要包括以下几个阶段：
- pre-crRNA的识别与结合：新转录的pre-crRNA通过其5’端茎环结构与Cas13蛋白的REC叶识别并结合，形成中间过渡态。
- 成熟crRNA的形成：NUC区的Helical-1和HEPN2结构域之间的保守残基构象发生变化，形成酸碱催化中心，催化酶切pre-crRNA形成成熟的crRNA。
- crRNA-Cas13复合物酶切活性的激活：靶ssRNA进入crRNA-Cas13复合物内与crRNA发生碱基互补配对，诱发Cas13蛋白发生构象变化，激活复合物的酶切活性。
- 靶RNA的降解：在crRNA的引导下，Cas13蛋白的HEPN结构域催化靶ssRNA的酶切，实现对特定RNA的降解。
CRISPR/Cas13系统作用机制示意图（以Cas13a为例）
Cas13与Cas9系统对比
| Cas13（VI型） | Cas9（II型） | |
|---|---|---|
| 靶标 | RNA | DNA |
| 切割活性 | RNase（ssRNA） | DNase（dsDNA） |
| 旁路活性 | 有（非特异切割RNA） | 无 |
| 应用方向 | RNA编辑、诊断 | 基因敲除/敲入 |