AAV（腺相关病毒）出现“空壳病毒”的原因主要与其包装过程中的不完全装配有关。下面是详细解释：
什么是空壳病毒？
空壳病毒是指未封装基因组DNA的AAV病毒颗粒，它们外壳完整，但内部不含或只含部分病毒基因组。
空壳产生的原因：
1.包装效率不高
AAV在293细胞等宿主中通过三质粒共转染系统进行包装。整个过程涉及多个步骤，包括基因组DNA的复制、衣壳蛋白的表达和基因组装入衣壳中。如果装配过程没能及时、正确地将DNA装进衣壳，就会形成空壳。
2.基因组装载速度慢
如果衣壳蛋白形成的速度快于基因组复制和装载速度，就会有一部分衣壳提前“合盖”，没有封装任何DNA。
3.包装信号识别失误
AAV的基因组包装依赖于ITR（inverted terminal repeat）结构作为信号，若DNA模板或ITR结构有问题，可能导致无法识别并装入衣壳。
4.辅助因子不足或条件不理想
AAV需要辅助病毒（如腺病毒或疱疹病毒）或其基因提供某些蛋白帮助其复制和装配。辅助因子表达不足或条件控制不理想，也可能造成包装失败。
空壳的影响：
1.对治疗效果不利：空壳不携带基因，无法发挥治疗作用。
2.免疫反应风险增加：空壳仍有完整的衣壳结构，容易被免疫系统识别，引发免疫反应。
3.降低有效颗粒比例：影响病毒滴度的真实性。
如何检测和去除空壳
常用的方法包括：
1.密度梯度超离心（如CsCl或碘克沙醇梯度）：空壳和实壳密度不同，可分离。
2.AEX（阴离子交换层析）：利用颗粒表面电荷差异进行纯化。
3.qPCR 或ELISA比值法：qPCR检测基因组数，ELISA检测衣壳总量，两者比值可反映空壳比例。
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