三质粒包装系统(rep/cap、腺病毒辅助质粒和目标载体质粒)

4 月 21 , 2025
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三质粒包装系统,是用于腺相关病毒 AAV等病毒载体系统生产中的一种常用策略,目的是实现高效、安全地包装病毒颗粒。这个系统常用于腺相关病毒(AAV)的生产,尤其是在基因治疗、病毒介导的基因转染等领域非常常见。

一、rep/cap 质粒(Replication and Capsid Plasmid)

主要功能:提供病毒的复制(rep)和衣壳蛋白(cap)编码基因。

适用范围:这个术语常用于 AAV 包装系统中。

rep基因编码病毒复制所需的蛋白。

cap基因编码形成病毒外壳的蛋白,决定了病毒血清型(如AAV2、AAV9等)。

二、腺病毒辅助质粒(Adenoviral Helper Plasmid)

主要功能:提供病毒生产所需的辅助功能(比如E2A、E4、VA RNA等),这些基因来自腺病毒,但去除了可复制能力,以确保安全。

适用范围:用于 AAV 包装系统,提供病毒粒子形成所需的辅助因子。

AAV 包装中不可缺少。

三、目标载体质粒(Transfer Plasmid 或 Expression Plasmid)

主要功能:携带你想要包装进病毒中的基因(转基因),也就是你想要导入目标细胞的表达盒(包括启动子、GOI(gene of interest)、报告基因等)。

该质粒中的序列会表达于目标细胞中。

对应于 AAV 中的 ITR 区域之间的载体序列。

 

AAV三质粒包装系统的举例:

Rep/Cap 质粒(如 pAAV2/9):提供复制蛋白和血清型决定性衣壳蛋白。

Helper 质粒(如 pHelper):提供来自腺病毒的辅助因子。

Transfer 质粒(如 pAAV-CAG-GFP):含有两端 ITR 序列夹着的表达盒,如 GFP 基因。

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