
腺相关病毒(AAV)颗粒在某些情况下可能会聚集在一起。
可能引起因素:
1.病毒颗粒的高浓度:当AAV在高滴度(>10¹³ vg/mL)储存时,颗粒之间可能会发生相互作用,导致聚集。
2.缓冲液成分:AAV在某些缓冲液(如PBS)中可能不够稳定,而在含有适量盐和表面活性剂的缓冲液中更稳定。
3.pH和温度变化:AAV在极端pH或高温条件下容易发生变性,从而导致颗粒聚集。
4.病毒衣壳的电荷:AAV的表面电荷在某些溶液条件下可能促进颗粒间的静电相互作用,导致聚集。
5.冻融循环:反复冻融会破坏病毒颗粒的完整性,并促进聚集。
预防AAV聚集的方法:
优化储存缓冲液:使用Hepes缓冲液或添加适量的表面活性剂。
避免高浓度储存:如果需要高滴度储存,可适当稀释或优化条件。
减少冻融循环:尽量分装并以-80°C长期储存,避免多次冻融。
超速离心纯化:如使用PEG沉淀或碘克沙醇梯度纯化,确保AAV颗粒的均一性。
AAV颗粒在特定条件下(如高浓度、不当缓冲液或反复冻融)可能发生聚集,但通过优化制备工艺、储存条件和缓冲液配方可有效减少聚集风险。在实际应用中,建议结合多种检测手段监控颗粒状态,以确保AAV制剂的稳定性和功能活性。
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