常见问题

是的，我们提供 piVector Designer 在线工具，帮助您设计慢病毒质粒。该工具中所提供的各类应用场景的质粒骨架均经过我们实验证实，具有良好的稳定性和表达效果。同时，我们还提供丰富的基因元件库，涵盖启动子、报告基因/筛选标记、调控元件以及 polyA 信号等。

此外，我们拥有具备博士背景的技术支持团队，可为您的设计方案提供专业评估与优化建议。

客户仅需提供 10 μg 质粒用于慢病毒生产。我们将在使用前对质粒进行扩增和质量控制，相关的质粒制备费用与周期已包含在服务费用中。

通常情况下，研究级慢病毒生产所需质粒量为：

• 5E7：约需 300 μg

• 1E8：约需 600 μg

临床前级慢病毒生产所需质粒量为：

• 5E7：约需 1.5 mg

• 1E8：约需 3 mg

所有接触过慢病毒或病毒感染细胞的设备和吸头，在废弃前应先浸泡于 10% 次氯酸钠（漂白剂）溶液中处理 20 分钟，然后作为生物危害废弃物进行处置。

我们使用 293T 贴壁细胞或 PCS01 悬浮细胞进行慢病毒生产，PCS01 是来源于 HEK293 的单克隆悬浮细胞系。

我们采用 Opti-Medium 作为慢病毒的储存缓冲液，使用浓度为 50 μl/mL。

病毒滴度通常有两种表示方式：功能滴度（也称为感染滴度，以 TU/mL 表示）和物理滴度（以 VP/mL 表示）。

物理滴度反映的是病毒颗粒的总量，通常通过检测病毒蛋白（如 p24）或病毒核酸含量来定量。而功能滴度则代表病毒实际感染细胞的能力，通常远低于物理滴度（一般低 100 至 1000 倍）。

尽管功能滴度更适用于准确计算感染复数（MOI），但检测过程相对复杂、耗时。在派真生物，我们的慢病毒规模是基于转导后的感染滴度进行定义，所提供的感染滴度明显高于通过 p24 测得的物理滴度，能为实验应用提供更高的准确性和参考价值。

由于转导单位（TU）是在病毒储存后测定的，我们不会对病毒进行浓缩或稀释，以避免额外的冻融过程对滴度造成显著影响。客户可在实际感染操作时根据需要自行调整使用浓度。

与多数供应商常用的滴度检测方法不同（如 qPCR 或 p24 ELISA），传统的 p24 ELISA 试剂盒虽在文献中广泛应用于测定慢病毒滴度，适用于检测天然或纯化后的重组病毒，但在未经纯化的粗制病毒上清中，可能存在大量未组装成病毒颗粒的游离 p24 蛋白，从而导致滴度被严重高估。

我们采用的是不同的方法。我们的滴度测定聚焦于转导后滴度（post-transduction titer），通过 qPCR 检测受感染细胞中病毒基因组的拷贝数，有效避免 p24 法因游离蛋白导致的高估问题。该方法可提供明显高于（约为 p24 测得的 100–1000 倍）物理滴度的真实感染滴度，确保实验应用中的准确性与一致性。

此外，如果慢病毒中包含荧光蛋白，我们还可通过对病毒系列稀释感染后获取的明场与荧光显微图像进行观察，进一步验证转导滴度的准确性。