包装出来的慢病毒感染细胞效率低

1 月 10 , 2025
分享:

慢病毒感染效率低可能与以下几个因素有关,以下是一些可能的原因和优化建议:

1. 病毒滴度低

包装的慢病毒浓度不足,导致细胞无法有效感染。

解决方案

优化慢病毒的包装流程,例如选择高效的包装细胞系(如293T细胞)。

增加病毒颗粒的浓缩步骤(如超速离心或PEG沉淀)。

确保使用高效的质粒体系(如第三代包装系统)来生成高滴度病毒。

2. 细胞类型的感染敏感性

目标细胞对病毒的易感性差:不同细胞对慢病毒的敏感性不同,如某些物种的干细胞系表面的LDL受体表达水平低,会影响慢病毒与其结合,进而降低感染效率。可选择LDL受体表达水平高的靶细胞进行病毒感染实验,或对目标细胞进行基因修饰,过表达病毒受体。

细胞生长状态不佳:细胞感染前生长状态异常,如存在支原体污染、细胞铺板密度过大等,都会影响感染效率。应确保细胞处于健康状态,生长密度适中,通常70%-80%为宜。

3. 慢病毒感染条件

感染条件(如MOI、温度、时间)不理想。

4. 病毒质量问题

病毒在生产、储存或运输过程中失活。

解决方案

避免病毒冻融多次,推荐将病毒储存在-80°C。

检查病毒是否受到补体或酶的影响,并在运输或操作时保持适当的保护措施。

5. 细胞状态

细胞状态不良(如过度融合、污染或分裂缓慢)会显著影响感染效率。

解决方案

确保细胞在对数生长期进行感染。

在感染前清洗细胞以去除代谢废物或污染物。

使用新鲜细胞培养基提高细胞活力。

6. 慢病毒包装系统问题

包装质粒比例不正确,或病毒基因组不稳定。

解决方案

确保包装质粒比例准确。

使用高效启动子(如CMV或EF1α)来驱动慢病毒的表达。

关于派真

作为一家专注于AAV 技术十余年,深耕基因治疗领域的CRO&CDMO,派真生物可提供从载体设计、构建到 AAV、慢病毒和 mRNA 服务的一站式解决方案。凭借深厚的技术实力、卓越的运营管理和高标准的服务交付,我们为全球客户提供一站式CMC解决方案,包括从早期概念验证、成药性评估到IITINDBLA的各个阶段。

 

凭借我们独立知识产权的π-alphaTM 293 细胞AAV高产技术平台,我们能将AAV产量提高多至10倍,每批次产量可达1×10¹⁷vg,以满足多样化的商业化和临床项目需求。此外,我们定制化的mRNA和脂质纳米颗粒(LNP)产品及服务覆盖药物和疫苗开发的各个阶段,从研发到符合GMP的生产,提供端到端的一站式解决方案。

下载