
为了减少冻融对AAV(腺相关病毒)的影响,可以采取以下措施:
1. 避免反复冻融
分装保存:收到AAV后,应按照每次使用量进行小体积分装(如10 μL或50 μL),避免反复冻融。
现用现配:如果需要稀释AAV,建议在冰浴中快速融化后立即进行操作,并尽快使用。
2. 优化储存条件
储存温度:长期保存应置于-80℃或液氮(-196℃)中,短期(1-2周)可暂存于4℃。
解冻方法:解冻时应在冰浴中缓慢融化,避免在室温或37℃快速解冻,以减少病毒活性损失。
3. 选择合适的缓冲液
添加稳定剂:在制备和储存AAV时,可选择添加甘油、蔗糖等稳定剂的缓冲液,以减少冻融对病毒结构的损害。
避免高浓度盐或不稳定组分:选择稳定性较好的缓冲液,避免使用可能对病毒颗粒造成影响的成分。
4. 快速处理与验证
快速处理:解冻后应立即使用,避免长时间暴露于室温。
验证滴度:如果AAV已经经历了多次冻融,建议通过qPCR或功能实验重新评估病毒活性。
5. 其他注意事项
无菌操作:在分装和使用过程中,需在超净工作台内操作,使用无菌耗材,避免污染。
避光保存:储存时需避光,防止额外因素加剧病毒失活。
通过以上方法,可以有效减少冻融对AAV的影响,确保其在实验中的稳定性和活性。
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