
慢病毒的滴度(即病毒颗粒的浓度)通常用以下两种单位表示,具体取决于检测方法:
1. 转导单位(Transducing Units, TU/mL)
定义:每毫升中能够成功感染并整合到宿主细胞基因组中的功能性病毒颗粒数量。
检测方法:通过感染靶细胞(如HEK293T细胞)后,检测报告基因(如荧光蛋白GFP、荧光素酶或抗生素抗性基因)的表达来定量。
特点:
反映病毒的功能性活性(即具有感染能力的病毒比例)。
TU/mL与实验条件(如靶细胞类型、感染时间、血清等因素)密切相关,需在相同实验条件下比较。
通常低于物理滴度(vg/mL),因为并非所有病毒颗粒都具有感染能力。
2. 病毒基因组拷贝数(Viral Genome Copies, vg/mL)
定义:每毫升中病毒基因组的总拷贝数(包括有感染力和无感染力的病毒颗粒)。
检测方法:通过定量PCR(qPCR)检测病毒基因组中特定序列(如慢病毒载体中的Ψ包装信号或目的基因)的拷贝数。
特点:
反映病毒的物理颗粒数量,但无法区分感染性病毒与非感染性病毒。
检测快速、标准化,但可能高估有效滴度(因包含缺陷颗粒)。
3. 两种单位的比较
指标 | TU/mL | vg/mL |
检测对象 | 功能性病毒颗粒 | 物理病毒基因组拷贝 |
实验周期 | 较长(需细胞感染实验) | 较短(qPCR直接检测) |
实际意义 | 更贴近实验效果(如转导效率) | 反映病毒制备的总产量 |
典型比值 | 通常 TU/mL ≈ 1/100~1/10 vg/mL | 取决于病毒制备质量 |
4. 其他注意事项
不同检测方法的差异:不同实验室使用的引物(如靶向病毒基因组的区域)或报告系统可能导致结果差异,需在相同条件下比较数据。
应用场景:
TU/mL:适用于功能性实验(如基因编辑、稳转细胞系构建)。
vg/mL:适用于病毒生产质量控制或优化包装工艺。
文献参考:发表论文时需明确说明检测方法(如“TU/mL determined by GFP expression”)。
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